歡迎進入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司!
技術文章
首頁 > 技術文章 > iPSC培養(yǎng)中的質量控制策略有哪些?

iPSC培養(yǎng)中的質量控制策略有哪些?

 更新時間:2024-08-19 點擊量:243

誘導多能干細胞(iPSC)的研究和應用正日益成為生物醫(yī)學領域的重要方向。然而,iPSC的培養(yǎng)過程中存在諸多不確定性,因此,進行規(guī)律性的質量控制( QC)對于確保實驗的可靠性、降低成本和提高效率至關重要。國際干細胞研究學會(ISSCR)提供了一系列指導原則和建議,本文將圍繞iPSC QC 的三個關鍵點:基本因素、功能性驗證和基因組穩(wěn)定性,探討何時進行QC檢測以及如何實施。

VIPS_InstiGro細胞鋪板儀

一、iPSC QC的關鍵點

iPSC QC(誘導多能干細胞質量控制)的關鍵點主要包括以下三個方面:

1. 基本因素:這些因素是評估iPSC質量的基礎,包括:

   細胞是否污染:檢查細胞培養(yǎng)物中是否存在細菌、真菌、支原體等外來污染。

   - STR類型:通過短串聯(lián)重復序列分析來確認細胞株的遺傳身份,確保其來源的準確性。

   生長速度:監(jiān)測細胞的增殖速率,以評估其生長活力。

   細胞形態(tài):觀察細胞的大小、形狀和排列,以判斷其正常性。

2. 功能性驗證:這些測試確保iPSC具有正常的生物學功能,包括:

   基因表達分析:通過RT-PCR、基因芯片等技術,檢測iPSC中特定基因的表達水平。

   分化潛能:評估iPSC分化為三種胚層細胞的能力,以及是否能形成功能性細胞類型。

3. 基因組穩(wěn)定性:這些分析確保iPSC的遺傳穩(wěn)定性,包括:

   拷貝數變異(CNV)分析:檢測細胞基因組中的拷貝數變化,這些變化可能導致基因功能的改變。

   單核苷酸變異(SNV)分析:識別基因組中的單點突變,這些突變可能影響細胞的功能。

   基因編輯正確性及脫靶效應評估:對于經過基因編輯的iPSC,檢查編輯是否準確以及是否存在非特異性的脫靶效應。

細胞鋪板

二、iPSC QC檢測的時機

重要項目開始前:在項目啟動前進行QC檢測,可以確保使用的iPSC質量合格,避免后續(xù)實驗的無效投入。

iPSC編輯或凍存后:編輯或凍存過程可能影響iPSC的質量,因此在這些操作后進行QC檢測十分必要。

細胞培養(yǎng)異常時:當細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)表型改變或實驗重復性差時,應及時進行QC檢測,以發(fā)現(xiàn)問題所在。

三、IPCS基因組突變的QC策略


  • 突變風險:研究顯示,iPSC細胞株有20%-30%的概率發(fā)生基因突變,這些突變可能隨著傳代次數的增加而加劇,對實驗結果產生嚴重影響。

  • 篩選時機:為了及時發(fā)現(xiàn)突變并降低成本,建議在iPSC還未進行重編程和基因改造的野生型(WT)時期進行篩選。

  • 高效鋪板方法:在需要大量樣本的情況下,手動鋪板不現(xiàn)實。采用安達望的VIPS高效率細胞鋪板系統(tǒng)結合CMX系統(tǒng)細胞檢測系統(tǒng)進行單克隆篩選和生長追蹤,可以提高效率。

  •  克隆恢復率:通過培養(yǎng)基的優(yōu)化,可以使克隆恢復率達到最高70%,確保篩選過程的效率。

  • l基因分析:選取單克隆來源且形態(tài)符合要求的克隆團進行基因分析,排除突變細胞株,從源頭避免突變帶來的風險。


      iPSC的培養(yǎng)和應用潛力巨大,但隨之而來的質量控制問題也不容忽視。通過遵循ISSCR的指導原則,我們可以在適當的時機進行有效的QC檢測,確保iPSC的質量和穩(wěn)定性。特別是在基因組突變方面,通過早期篩選和高效的單克隆篩選技術,我們可以減少突變風險,提高實驗的可靠性和效率。隨著iPSC技術的不斷進步,未來還將出現(xiàn)更多高效、精確的QC方法,為iPSC的研究和應用提供更強有力的支持。

單細胞鋪板設備

安達望的VIPS高效率細胞鋪板系統(tǒng)結合CMX系統(tǒng)細胞檢測系統(tǒng)進行單克隆篩選和生長追蹤,可以提高效率。更多實驗室儀器,實驗耗材,細胞生長試劑可以進入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司進行了解。