歡迎進入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司!
技術文章
首頁 > 技術文章 > mRNA疫苗生產流程及具體步驟

mRNA疫苗生產流程及具體步驟

 更新時間:2023-02-08 點擊量:1532
mRNA疫苗生產流程及具體步驟

Step 1:將含毒的核酸序列的質粒,注入到大腸桿菌中,這里的質粒可以是從病毒中提取,但更安全有效的方法是根據(jù)發(fā)表的核酸序列優(yōu)化設計直接連接到質粒上,避免跟病毒直接接觸;

Step 2:在溫暖適宜的條件下,大量繁殖生長攜帶了質粒的大腸桿菌;

Step 3:將上述生長繁殖的大腸桿菌轉移至體積更大的營養(yǎng)液里,適宜條件下存放發(fā)酵,使其復制億萬級別的質粒;

Step 4:發(fā)酵結束后,加入酶或者其他化學物質分解大腸桿菌細胞壁,收集并純化質粒;

Step 5:檢測上述的質粒,確保質粒攜帶的基因序列未發(fā)生變異,能夠用于后續(xù)的疫苗生產;

Step 6:加入限制性核酸內切酶,從環(huán)狀的質粒中切割出直線段的病毒基因,并除去殘留的細菌和質粒片段;

Step 7:根據(jù)“中心法則",以DNA為模板轉錄成mRNA;mRNA進入人體,其攜帶的病毒基因即可在體內翻譯出病毒蛋白,即為抗體,用于中和病毒;mRNA也需進行質量中控,確保能用于后續(xù)的疫苗生產;

Step 8:準備脂質,用于保護mRNA進入體內時不會被破壞;

Step 9:精確的控制著mRNA和脂質流速,將他們混合成脂質納米粒。


具體生產步驟如下:

步驟一:從冷庫中提取DNA

第一步生產人員會從主細胞庫中提取RNA/dna,提取后的DNA會被技術人員提取后保存在-150℃的小實驗瓶中。之后技術人員將會把解凍了的質粒注入進一批已經(jīng)做了人工調整了的大腸桿菌里,從而使大腸桿菌把質粒帶入自己細胞里。通常情況下一小瓶裝滿質粒的實驗瓶能夠用來生產5000萬劑疫苗。


步驟二:成長繁殖

涵蓋了大腸桿菌以及質粒的溶液將會被裝在實驗瓶中,并且在一種溫暖無菌的琥珀色生長培養(yǎng)基中生長與繁殖。


步驟三:發(fā)酵混合物(細菌)

以上提到的細菌會被給予一晚的時間進行生長繁殖,然后會被轉移至營養(yǎng)液中存放四天,進行細菌繁殖和DNA復制。


步驟四:凈化并采集DNA

發(fā)酵過程在經(jīng)歷了四天后,研究人員將會往里注入一種化學物質來分解細菌的細胞壁,隨后會凈化混合物,并且最終提取到僅留的質粒。分解細胞壁——凈化提取質粒


步驟五:質量檢測

被提取出來的質粒將會被技術人員通過和之前的樣品進行對比,以確認剛剛生產的質粒的病毒基因序列能夠被用于生產疫苗。


步驟六:質粒線性化

質粒通過質檢后,技術人員將會加入酵素進行環(huán)狀質粒切割,把病毒基因從環(huán)狀狀態(tài)切割成直線段。


步驟七:純化DNA

技術人員將會將純度已經(jīng)較高的混合物進行再一次純化,用于濾出殘留的細菌或質粒片段。


步驟八:運輸

在運輸前每瓶DNA都會被冷凍、裝袋、密封,然后被放入一個裝有足夠干冰的容器里,這些容器將會被轉運到另一家工廠進行轉錄。


步驟九:進行DNA到mRNA的轉變(體外轉錄IVT)

轉運過來的DNA將會先進行解凍然后摻入由mRNA組成的部分混合,隨后酵素將會撬開DNA模板并轉化其成為mRNA。之后得到的混合物將會被移入到一個儲罐里,并且通過過濾去除雜質。


步驟十:mRNA檢測

過濾后的mRNA將會被反復測試以確保其出精度以及基因序列是否準確。


步驟十一:冷藏、打包和再次運輸

檢測后的mRNA包冷凍到零下20度,然后運到工廠。將會在那里做成疫苗,然后再把樣本運回來檢測。


步驟十二:準備mRNA

收到mRNA的包裹后,保持冷凍直到需要用時,每個包能個制造60萬瓶,360萬劑的疫苗。


步驟十三:脂質納米粒遞送系統(tǒng)制備(LNP)

同時,另一個步驟也在進行,準備脂質納米?!@種物質能保護mRNA進入人體細胞時不會被破壞。


步驟十四:制作mRNA疫苗

準備好之后,通過機器精確控制mRNA和脂質,將他們混合成脂質納米粒,形成疫苗顆粒。


步驟十五:準備疫苗瓶

清洗和高溫消毒疫苗瓶,13部高速攝像機在盯著流水線,每一個瓶子都要拍超過100張照片,有裂縫、碎片和其他問題的瓶子,將會迅速從生產線篩選出去。


步驟十六:罐裝疫苗

機器將0.45毫升疫苗注射到一個瓶子,稀釋后,成為6個劑量的疫苗。生產線每分鐘能包裝575個瓶子。


步驟十七:打包、冷藏和測試

灌注完的疫苗經(jīng)過檢查,貼上標簽,然后放進盒子里打包。所有盒子要再冷凍數(shù)天,降溫到零下70℃的極冷溫度。與此同時,該批次的疫苗要送去做檢測。


步驟十八:打包和運輸成品疫苗

數(shù)周的測試后,合格的疫苗可以運輸了。盒子里裝上了溫度計,實時監(jiān)測溫度是否達標。每個盒子里有45磅的干冰。