HEK293細(xì)胞株

HEK293細(xì)胞株

早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點(diǎn)的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2。HEK293細(xì)胞株-人胚胎腎細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主?？杀磉_(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。

細(xì)胞名稱：人胚腎細(xì)胞

細(xì)胞簡稱：HEK-293

產(chǎn)品貨號(hào)：TCH-C190

種屬來源：人

組織來源：胚腎

疾病特征：/

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S

配套培養(yǎng)基貨號(hào)：TCH-G190

傳代比例：1:4-1:8，每2-3天換液一次

傳代周期：24-48 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測：細(xì)菌、真菌、支原體檢測均為陰性

參考文獻(xiàn)：

"Xie QW, et al. Complementation analysis of mutants of nitric oxide synthase reveals that the active site requires two hemes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 4891-4896, 1996. PubMed: 8643499

Da Costa LT, et al. Converting cancer genes into killer genes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 4192-4196, 1996. PubMed: 8633039

Graham FL, et al. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5. J. Gen. Virol. 36: 59-72, 1977. PubMed: 886304

Graham FL, et al. Defective transforming capacity of adenovirus type 5 host-range mutants. Virology 86: 10-21, 1978. PubMed: 664220

Harrison T, et al. Host-range mutants of adenovirus type 5 defective for growth in HeLa cells. Virology 77: 319-329, 1977. PubMed: 841862

Bodary SC, McLean JW. The integrin beta 1 subunit associates with the vitronectin receptor alpha v subunit to form a novel vitronectin receptor in a human embryonic kidney cell line. J. Biol. Chem. 265: 5938-5941, 1990. PubMed: 1690718

Goodrum FD, Ornelles DA. The early region 1B 55-kilodalton oncoprotein of adenovirus relieves growth restrictions imposed on viral replication by the cell cycle. J. Virol. 71: 548-561, 1997. PubMed: 8985383"

HEK293細(xì)胞-人胚胎腎細(xì)胞使用說明書

收貨當(dāng)天如何處理細(xì)胞？

收到細(xì)胞后請務(wù)必仔細(xì)閱讀產(chǎn)品資料，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性 (貼壁/懸浮/半貼壁半懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)體系、傳代比例和換液頻率等。

| T25培養(yǎng)瓶常溫運(yùn)送

1. 收到細(xì)胞后，請先檢查培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)基是否外滲、渾濁，并核對瓶身上的標(biāo)簽信息、細(xì)胞數(shù)量是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，及時(shí)與我們聯(lián)系。

注：培養(yǎng)瓶內(nèi)飄浮的小體積絮狀物可能是脫落的細(xì)胞，對于這種情況，建議在細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2 h 后再觀察，如仍有細(xì)胞未貼壁，可收集培養(yǎng)上清離心后再接種到原瓶或新的培養(yǎng)容器中。

2. 用75%酒精消毒細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，不要打開培養(yǎng)瓶，將細(xì)胞平放于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置1~2 h，待細(xì)胞恢復(fù)基本生長狀態(tài)后，再進(jìn)行后續(xù)操作。

3. 顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時(shí)請拍攝清晰的100×、200×照片各2~3張留存。

4. 細(xì)胞種類不同，細(xì)胞的運(yùn)輸液不同。請根據(jù)培養(yǎng)瓶上的標(biāo)識(shí)判斷培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基是否可以繼續(xù)使用。

5. 若細(xì)胞密度低于80%，請及時(shí)更換為預(yù)熱的培養(yǎng)基培養(yǎng)。若細(xì)胞密度大于80%，可進(jìn)行傳代。具體見《細(xì)胞培養(yǎng)操作說明》。

| 凍存管干冰運(yùn)送

1. 收到細(xì)胞后，請先檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損等情況，并核對凍存管上的標(biāo)簽信息、細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，及時(shí)與我們聯(lián)系。

2. 低溫保存的細(xì)胞非常脆弱，細(xì)胞收到后如在24 h內(nèi)復(fù)蘇，可存放于-80℃冰箱；超過24 h請存放于液氮中。建議盡快復(fù)蘇，具體復(fù)蘇操作見《細(xì)胞培養(yǎng)操作說明》。

3. 復(fù)蘇細(xì)胞后，換液之前需在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時(shí)請拍攝清晰的100×、200×照片各2~3張留存。

4. 部分細(xì)胞貼壁時(shí)間較長，請根據(jù)說明書進(jìn)行操作。若復(fù)蘇有異常，及時(shí)與我們聯(lián)系。

5. 后續(xù)根據(jù)細(xì)胞匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

| 血清管常溫運(yùn)送

1. 在收到細(xì)胞后，請先檢查試劑管是否完好，培養(yǎng)基是否外滲，并核對試劑管上的標(biāo)簽信息、細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，及時(shí)與我們聯(lián)系。

2. 收到細(xì)胞后請盡快進(jìn)行處理，如不能及時(shí)處理，請將細(xì)胞放至常溫環(huán)境，通常15~25℃為佳，并盡量在24 h內(nèi)處理。血清管細(xì)胞懸液可能會(huì)呈現(xiàn)一定程度的渾濁，屬于正?，F(xiàn)象，可放心操作。

3. 用75%酒精消毒血清管表面，在潔凈工作臺(tái)內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15 mL離心管中。

4. 吸取1 mL預(yù)熱的培養(yǎng)基清洗血清管內(nèi)壁，同樣轉(zhuǎn)移至15 mL離心管，并吹打均勻。

5. 250 g離心4 min。離心后去除上清，加入適量預(yù)熱培養(yǎng)基重懸后接種至合適大小的培養(yǎng)容器中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

6. 換液前需在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時(shí)請拍攝清晰的100×、200×照片各2~3張留存。

7. 后續(xù)根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。具體見《細(xì)胞培養(yǎng)操作說明》。

| 細(xì)胞膠囊技術(shù)

1. “細(xì)胞膠囊"包括細(xì)胞管和溶解Buffer共2個(gè)試劑管。收到細(xì)胞后，請先檢查試劑管是否完好，培養(yǎng)基是否外滲，并核對管身上的標(biāo)簽信息、細(xì)胞數(shù)量是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，及時(shí)與我們聯(lián)系。

2. 收到“細(xì)胞膠囊"后需盡快處理, 如不能及時(shí)處理, 請將細(xì)胞放至常溫環(huán)境, 通常15~25℃為佳，并盡量在24 h內(nèi)處理?！凹?xì)胞膠囊"管內(nèi)的液體肉眼觀察可能會(huì)呈現(xiàn)一定程度的渾濁，這屬于正?，F(xiàn)象，可放心操作。

3. 用75%酒精消毒試劑管表面，在潔凈工作臺(tái)內(nèi)小心的打開細(xì)胞膠囊管蓋，盡量避免氣泡溢出。

4. 小心棄去細(xì)胞膠囊管中的全部液體。

5. 將溶解Buffer全部加入到細(xì)胞膠囊管中，擰緊管蓋，上下顛倒3~5 min。觀察到球狀的細(xì)胞膠囊溶解后，小心開蓋，使用移液槍輕柔吹打數(shù)次，將所有液體轉(zhuǎn)移到15 mL離心管內(nèi)。

7. 250 g離心4 min。離心后去上清，加入適量預(yù)熱培養(yǎng)基重懸后，將細(xì)胞懸液接種到合適大小的培養(yǎng)容器中（T25瓶或6cm皿），放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

8. 換液前需在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時(shí)請拍攝清晰的100×、200×照片各2~3張留存。如有異常情況，及時(shí)與我們聯(lián)系。

9. 后續(xù)根據(jù)細(xì)胞匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。具體見《細(xì)胞培養(yǎng)操作說明》。