如何從實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用來看印度尼帕病毒疫情？

印度出現(xiàn)致死率高大75%的尼帕病毒疫情，國內(nèi)專家稱輸入風(fēng)險(xiǎn)可控但存在。從實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)層面看，我們具備快速識(shí)別和應(yīng)對(duì)這種病毒的能力嗎？需要哪些硬件和試劑支持？

作為一名長期服務(wù)于生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備支持人員，我從實(shí)驗(yàn)室檢測的實(shí)操角度來談?wù)勥@個(gè)問題。

從技術(shù)能力和物資儲(chǔ)備上看，國內(nèi)對(duì)于尼帕病毒這類已知但罕見的輸入性傳染病，具備快速響應(yīng)的檢測能力。這背后是一套成熟的“病原體核酸檢測體系"在支撐，而PCR技術(shù)正是該體系的核心。

一、尼帕病毒檢測的技術(shù)核心：實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）

目前，尼帕病毒的檢測主要依靠核酸檢測（測序或PCR）。其中，qPCR因其速度快、靈敏度高、能定量，成為疫情篩查的主流選擇。實(shí)現(xiàn)一次可靠的qPCR檢測，需要三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)配合無間：

樣本處理與核酸提取：從疑似樣本（如痰液、腦脊液）中純化出病毒RNA。這一步需要高效的核酸提取試劑盒和自動(dòng)化提取設(shè)備，以保障得率、純度并保護(hù)操作者安全。

逆轉(zhuǎn)錄（RT）：尼帕病毒是RNA病毒，必須將其RNA逆轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA（cDNA），才能進(jìn)行后續(xù)的PCR擴(kuò)增。這一步是決定檢測“特異性"的關(guān)鍵，需要高質(zhì)量的逆轉(zhuǎn)錄試劑來保證轉(zhuǎn)換效率與準(zhǔn)確性。

熒光定量PCR擴(kuò)增與檢測：使用針對(duì)尼帕病毒特異性基因序列設(shè)計(jì)的引物和探針，對(duì)cDNA進(jìn)行指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，并通過熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測。這一步的成敗，依賴核心設(shè)備熒光定量PCR儀的性能。

二、硬件支撐：高性能熒光定量PCR儀作為核心技術(shù)平臺(tái)

再好的試劑與方案，也需要在精密的儀器上運(yùn)行。用于病原體檢測的qPCR儀，其性能直接關(guān)乎檢測的“快、準(zhǔn)、穩(wěn)"。在應(yīng)對(duì)尼帕病毒這類突發(fā)疫情時(shí)，一臺(tái)優(yōu)秀的設(shè)備必須在以下方面表現(xiàn)硬核：

極速且精準(zhǔn)的溫控：這是PCR擴(kuò)增的物理基礎(chǔ)。病毒的核酸片段需要在變性、退火、延伸三個(gè)溫度間進(jìn)行數(shù)十次循環(huán)，任何微小偏差都會(huì)影響結(jié)果。例如，采用美國MARLO半導(dǎo)體芯片的設(shè)備，可實(shí)現(xiàn)升溫速率6℃/秒、降溫5℃/秒的快速變溫，能將整體檢測時(shí)間壓縮到最短，為疫情防控爭取“黃金窗口"。同時(shí)，其樣品臺(tái)溫度均勻性 ≤±0.2℃、準(zhǔn)確性 ≤±0.1℃，確保96個(gè)反應(yīng)孔處于幾乎一致的熱環(huán)境中，從根本上杜絕因孔間溫差導(dǎo)致的擴(kuò)增效率差異，保證定量結(jié)果的可靠。

靈敏而穩(wěn)定的光學(xué)檢測系統(tǒng)：成功擴(kuò)增產(chǎn)生的熒光信號(hào)極其微弱。采用頂部檢測技術(shù)和SSLPTM短光程靜態(tài)熒光CCD成像技術(shù)，能有效屏蔽背景干擾，大幅提高信噪比，確保即使病毒載量很低也能被清晰捕獲。支持FAM、VIC、ROX、CY5等多通道熒光檢測，則允許在同一反應(yīng)中同時(shí)檢測病毒靶標(biāo)和內(nèi)參基因，一次實(shí)驗(yàn)獲得多重信息，提升效率與質(zhì)控水平。

為高強(qiáng)度應(yīng)急檢測而生的智能化設(shè)計(jì)：疫情篩查往往是24小時(shí)不間斷的。儀器使用壽命需高達(dá)100萬次循環(huán)，核心部件穩(wěn)定耐用是基本要求。此外，自帶10英寸可90度調(diào)節(jié)的全彩觸控屏，使技術(shù)人員無需連接電腦即可在機(jī)器上完成全部編程、運(yùn)行和數(shù)據(jù)分析，界面直觀；結(jié)合以太網(wǎng)遠(yuǎn)程操控功能，便于核心實(shí)驗(yàn)室外或不同班次人員實(shí)時(shí)監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)，這在高致病性病原體檢測中提升了操作安全性與協(xié)作效率。溫度梯度功能（可在30-100℃范圍內(nèi)設(shè)置1-30℃的梯度）則為快速優(yōu)化尼帕病毒等新發(fā)病原體的檢測條件提供了強(qiáng)大工具。

以朗基Q2000B型熒光定量PCR儀為例，其上述特性完整詮釋了一臺(tái)勝任應(yīng)急檢測的設(shè)備應(yīng)具備的素質(zhì)。朗基作為國內(nèi)擁有完整半導(dǎo)體式PCR儀生產(chǎn)線的品牌，其產(chǎn)品系列豐富，尤其在熒光定量檢測方面確保了在檢測速度、結(jié)果可靠性和系統(tǒng)穩(wěn)定性上能滿足疾控、海關(guān)等前沿哨點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的苛刻要求。

三、國內(nèi)企業(yè)的角色與我們的準(zhǔn)備

正如新聞報(bào)道，碩世、凱普、圣湘等國內(nèi)IVD企業(yè)已宣布具備尼帕病毒核酸檢測試劑盒的供應(yīng)能力。這為檢測體系提供了核心且特異的反應(yīng)組分。
  而專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室綜合服務(wù)商，則負(fù)責(zé)整合并提供支撐上述檢測體系運(yùn)行的全套硬件、核心試劑與關(guān)鍵耗材。比如：蘇州阿爾法生物提供從朗基Q2000B這類高性能qPCR儀，到配套的高質(zhì)量PCR預(yù)混液、八聯(lián)排管、核酸提取板，再到生物安全柜、精密移液器等，提供“一站式"的產(chǎn)品供應(yīng)與及時(shí)的技術(shù)支持，確保從樣本接收到報(bào)告發(fā)出的整個(gè)檢測鏈路堅(jiān)實(shí)、流暢，不會(huì)“掉鏈子"。

技術(shù)層面，我國建立起的傳染病病原體監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)和成熟的生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈，有能力對(duì)尼帕病毒等輸入性威脅做出快速技術(shù)反應(yīng)。這份能力的背后，是不斷迭代的、能夠在溫控速度、檢測靈敏度、操作智能化和運(yùn)行可靠性上經(jīng)受住考驗(yàn)的高性能儀器，以及完整供應(yīng)鏈的支撐。作為產(chǎn)業(yè)鏈中的一員，我們已做好準(zhǔn)備，為前沿的檢測實(shí)驗(yàn)室提供穩(wěn)定可靠的產(chǎn)品與服務(wù)，共同守護(hù)公共衛(wèi)生安全。