動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是生命科學研究中的重要工具，它為科學家們提供了一個體外模擬生物體內(nèi)細胞生長和分裂的環(huán)境。通過動物細胞培養(yǎng)，研究人員可以深入研究細胞的生理功能、代謝途徑以及疾病的發(fā)生機制，為人類的健康和福祉做出貢獻。本文將介紹動物細胞培養(yǎng)的程序和方案。
1. 生長條件
動物細胞培養(yǎng)需要使用比微生物生長所用的基本培養(yǎng)基更復雜、更具體的特定培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中重要的基本成分包括無機鹽、氮源、能量源、維生素、脂肪及脂溶性維生素、生長因子、激素等，有時還會添加pH緩沖系統(tǒng)、抗生素等。生長的溫度取決于細胞的來源，因為不同的生物體需要不同的溫度來生長和分裂。溫血動物細胞培養(yǎng)的最適溫度為37℃，冷血動物的生長溫度為15℃-25℃。
2. 原代細胞培養(yǎng)
原代細胞培養(yǎng)物是利用無菌剃刀從器官中取出的新鮮組織獲得的。在某些情況下，使用化學分解劑或蛋白水解酶去除細胞間質(zhì)。用緩沖液清洗獲得的細胞懸浮液以去除蛋白水解酶。將細胞懸浮液倒入平坦的表面上，可以是培養(yǎng)容器或無菌培養(yǎng)皿。將能夠粘附在容器底部的細胞覆蓋在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中并在室溫下孵育。
3. 細胞解凍
在隨后的傳代培養(yǎng)中，可能必須使用保存的細胞培養(yǎng)物。將水浴加熱至 37°C 的溫度，并對要接種細胞的生長培養(yǎng)基進行加熱。將溫熱的培養(yǎng)基加入培養(yǎng)容器中，然后將裝有冷凍細胞的瓶子放入水浴中直至解凍。解凍后，用 70% 酒精清洗孔的外部。將細胞懸浮液移入細胞培養(yǎng)容器中，輕輕旋轉(zhuǎn)以混合所有物質(zhì)。然后將培養(yǎng)基在通常的生長條件下培養(yǎng)過夜。第二天更換生長培養(yǎng)基。
4. 胰蛋白酶化細胞
胰蛋白酶消化是利用蛋白水解酶將粘附細胞從培養(yǎng)容器表面分離的方法。當細胞要用于傳代、計數(shù)或其他目的時，就會進行此操作。除去培養(yǎng)基，回收細胞，然后用磷酸鹽緩沖液清洗細胞。將溫熱的胰蛋白酶-EDTA加入到容器中，以覆蓋單層細胞。可以搖動容器以確保單層細胞被覆蓋。將容器放入 37°C 的 CO2 培養(yǎng)箱中孵育1-3分鐘。將容器從培養(yǎng)箱中取出，用手掌用力敲擊燒瓶的側(cè)面，以幫助分離。一旦細胞被移除，它們就會被重新懸浮在含有一定量血清的適當生長培養(yǎng)基中。然后借助注射器針頭，通過破壞細胞團塊來分離細胞，并進行相應使用。
5. 傳代培養(yǎng)
傳代培養(yǎng)是指將原代培養(yǎng)的細胞從培養(yǎng)容器表面分離下來，重新接種在新的培養(yǎng)基中，使其繼續(xù)生長和分裂的過程。傳代培養(yǎng)是動物細胞培養(yǎng)中非常重要的一步，它使得研究人員能夠獲得大量的細胞用于后續(xù)的實驗研究。
6. 細胞凍存
為了長期保存細胞，研究人員需要將細胞進行凍存。細胞凍存是將細胞置于特定的凍存液中，然后通過降溫的方式使細胞進入休眠狀態(tài)，從而在低溫條件下長期保存細胞。凍存后的細胞可以在需要時進行解凍和復蘇，繼續(xù)進行培養(yǎng)和實驗研究。
7. 細胞分選和純化
在動物細胞培養(yǎng)過程中，為了獲得具有特定表型的細胞群體，研究人員需要進行細胞分選和純化。細胞分選是通過特定的方法將細胞按照其表型或功能進行分離的過程。而細胞純化則是將細胞分選后得到的細胞群體進一步純化，以獲得更純凈的細胞亞群。
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