一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較
二、考馬斯亮藍(lán)染色
CBB 染色液
0.5%考馬斯亮藍(lán) G250 或 R250
40%甲醇
10%乙酸
將 CBB 溶于甲醇中并不停的攪拌 15min。加入乙酸與 ddH2O 脫色液： 30%甲醇
10%乙酸
染色方法： 1.在搖床上染色 30min.
2.脫色至蛋白點(diǎn)或條帶清晰可見
3. ddH2O 洗 3-5 次
三、膠體考馬氏亮藍(lán)染 色 Colloidal Coomassie Staining（ Cambridge centre for porteomics ）
sensitivity = ~100ng
1. 固定：甲醇/醋酸/H2 O(45:1:54) 至少 20min.
2. 染色 12-18hr。
染色液： 17% (w/v) 硫酸銨
34%甲醇
0.5%醋酸
0.1% (w/v) Coomassie G250
3. 脫色：用 H2O 脫色至蛋白點(diǎn)和背景清晰.
雙向電泳蛋白點(diǎn)的切取和保存
1. 用 PDQuest 軟件或肉眼比對(duì)，找出感興趣的蛋白點(diǎn)，并做好標(biāo)記和記錄。
2. 用 MilliQ 水沖洗膠 2 次。
3. 用色譜純甲醇和 MilliQ 水沖洗 Ep 管
4. 將槍頭(200µl)下端剪去，使其內(nèi)徑略小于蛋白斑點(diǎn)的直徑，用色譜純甲醇和 MilliQ 水沖洗槍頭。
5. 對(duì)準(zhǔn)斑點(diǎn)中央小心將蛋白切割下來， 放入 Ep 管，MilliQ 水漂洗 2 次， 如膠塊 太大，將其切成 1 x 1 mm 的膠片。
6. 將切好的點(diǎn)做好標(biāo)記和記錄，置-80oC 保存或凍干后-20oC 存放。
注意事項(xiàng)：
1. 盡量避免皮膚和頭發(fā)的角蛋白的污染，在操作過程中應(yīng)戴一次性的 PE 手套 （不用乳膠手套）和帽子。
2. 不要將膠長期存放于乙酸溶液中。
3. Ep 管及染膠的容器必須用甲醇和水充分清洗， 尤其應(yīng)與進(jìn)行 Western blotting 的容器分開，以避免 casein 或 BSA 的污染。
