貼壁細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，但在實(shí)際操作過(guò)程中，常常會(huì)遇到一些問(wèn)題。下面將介紹貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的五大問(wèn)題，并提供相應(yīng)的解決方法。
1. 傳代后部分細(xì)胞漂浮
原因及解決方法如下：
- 傳代前細(xì)胞密度太大：細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)可以進(jìn)行傳代操作，傳代密度需要適中，密度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致傳代后細(xì)胞漂浮。
- 細(xì)胞狀態(tài)不好：可以通過(guò)提高血清比例、保持穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境等方法改善細(xì)胞狀態(tài)。
- 吹打次數(shù)過(guò)多造成機(jī)械損傷：在吹打過(guò)程中要輕柔操作，當(dāng)細(xì)胞呈單顆粒時(shí)可停止吹打，避免產(chǎn)生氣泡。
- 培養(yǎng)基更換后不適應(yīng)：可以將培養(yǎng)基換回原來(lái)使用的培養(yǎng)基，或者與原培養(yǎng)基比例混合后使用，讓細(xì)胞有一個(gè)適應(yīng)期。
- 培養(yǎng)液配制和儲(chǔ)存不當(dāng)，如pH值過(guò)堿、谷氨酰胺含量不足等原因：注意正確配制培養(yǎng)液并儲(chǔ)存好，確保培養(yǎng)液的質(zhì)量。
2. 傳代后細(xì)胞變形
原因及解決方法如下：
- 變形但細(xì)胞仍在生長(zhǎng)：可能是血清批次不一樣導(dǎo)致的，建議使用同一批次的血清，若更換血清則需要與原血清混合并逐漸過(guò)渡。
- 變形且細(xì)胞不長(zhǎng)且碎片增多：可能是傳代操作過(guò)程中的損傷，如消化不當(dāng)或細(xì)胞受到污染。應(yīng)根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)調(diào)整消化時(shí)間，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，確保細(xì)胞無(wú)外源性污染。
3. 細(xì)胞生長(zhǎng)周期變慢，邊養(yǎng)邊漂
原因及解決方法如下：
- 細(xì)胞傳代時(shí)密度太稀或太密：建議在細(xì)胞融合度達(dá)到80%左右進(jìn)行傳代，傳代密度適度，密度過(guò)低會(huì)延長(zhǎng)生長(zhǎng)周期，密度過(guò)高會(huì)造成細(xì)胞接觸抑制。
- 傳代操作不當(dāng)：根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整消化時(shí)間，觀察細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落后終止消化，頻繁換液和清洗細(xì)胞也會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)，常規(guī)換液時(shí)間間隔為2-3天。
4. 傳代后細(xì)胞成團(tuán)
解決方法如下：
- 低密度接種，延長(zhǎng)換液時(shí)間，避免細(xì)胞脫落。
- 使用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)器皿，增加細(xì)胞貼壁的牢固度，減少細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率。
- 重新鋪板，并更換新配制的培養(yǎng)基，增加血清的比例但不超過(guò)5%。
- 接種時(shí)減少培養(yǎng)基量，以加快細(xì)胞貼壁的速度，等待細(xì)胞貼壁后再補(bǔ)加培養(yǎng)基到正常用量。
5. 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞出現(xiàn)空泡
原因及解決方法如下：
- 正常的細(xì)胞活動(dòng)：有些細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)正常的自噬行為或其他膜泡活動(dòng)，無(wú)需特殊處理。
- 細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良：可能是由血清不適應(yīng)、培養(yǎng)基成分改變或換液不及時(shí)等原因?qū)е碌?，可以通過(guò)更換適合的血清或及時(shí)換液來(lái)解決。
- 細(xì)胞受損：注意培養(yǎng)條件和操作手法，避免機(jī)械損傷或pH值過(guò)高或過(guò)低等情況。
通過(guò)了解這些常見(jiàn)的貼壁問(wèn)題及解決方法，可以幫助科研人員在貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中更好地處理各種技術(shù)難題，從而獲得高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果。
蘇州阿爾法生物與海星生物深度合作提供以下產(chǎn)品與服務(wù)：
HyCyte™ 干細(xì)胞、原代細(xì)胞、細(xì)胞系、三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、專用培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基、基因編輯試劑盒、細(xì)胞株現(xiàn)貨、細(xì)胞專用血清等細(xì)胞生物學(xué)試劑。
蘇州阿爾法提供的過(guò)氧化氫消毒液、季銨鹽消毒劑、復(fù)方季銨鹽消毒液、殺孢子劑、醇類消毒液、濃縮消毒液、除霉菌消毒液、無(wú)塵布、潔凈抹布、滅菌拖把等廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、制藥企業(yè)、醫(yī)藥研發(fā)、疾控防御、檢驗(yàn)檢疫等多種場(chǎng)景.
提供的服務(wù)包括：CRISPR-Cas9細(xì)胞基因編輯、載體構(gòu)建,病毒包裝,分子量標(biāo)準(zhǔn)品，突變基因標(biāo)準(zhǔn)品，融合基因標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)，細(xì)胞干擾等服務(wù)。
更多關(guān)于實(shí)驗(yàn)室儀器，實(shí)驗(yàn)耗材，實(shí)驗(yàn)試劑，季銨鹽消毒液價(jià)格請(qǐng)進(jìn)入蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材網(wǎng)站進(jìn)行了解。
