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國產(chǎn)PCR儀購買時(shí)的注意事項(xiàng)

 更新時(shí)間:2023-02-21 點(diǎn)擊量:797

國產(chǎn)PCR儀購買時(shí)的注意事項(xiàng)

PCR儀作為分子生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的常規(guī)儀器,每年都有數(shù)千臺的選購量,這兩年一批國產(chǎn)PCR儀正在興起。購買國產(chǎn)PCR儀需要考慮以下因素
1樣本管的種類
現(xiàn)在主要有0.2ml和0.5ml兩種,使用0.5ml PCR管的人員已經(jīng)很少了,一是0.5ml PCR專用的薄壁管很少見,二是如果想要較大體積的PCR產(chǎn)物,可以通過多分幾個0.2ml PCR管來實(shí)現(xiàn)。除非經(jīng)常需要較大體積的PCR產(chǎn)物,否則可以不必考慮0.5ml型的PCR儀。
2 樣本容量
種類很多,0.2ml的有96孔和48孔,0.5ml的有60孔和30孔,384孔等,當(dāng)然還有一些其他組合:如0.2ml的48孔與0.5ml的30孔組合。購買96孔的還是48孔的PCR儀主要從經(jīng)濟(jì)上考慮,當(dāng)然現(xiàn)在很多的廠家都有雙48孔的產(chǎn)品,可以當(dāng)兩臺48孔的PCR儀使用,也是一個比較好的選擇,但48孔的PCR儀大都沒有梯度功能。
 
一般來講384孔都是用384孔的,對封膜的要求比較高,一定要采用專門用于PCR反應(yīng)的膜,普通封板膜會影響PCR反應(yīng),造成實(shí)驗(yàn)失敗。還有一些特別的PCR儀,如用于原位PCR的。
3 溫度梯度功能
即不同列或不同行之間溫度可以為不同的溫度。這一功能對于固定PCR程序的檢驗(yàn)人員來講,可能用處不大,但對于經(jīng)常進(jìn)行不同基因擴(kuò)增的研究人員來講可以說是必須的。因?yàn)榇蠹叶贾繮CR反應(yīng)的復(fù)性溫度是PCR成功的要素,PCR復(fù)性溫度只有通過溫度梯度實(shí)驗(yàn)來選擇才是適宜的,你可以通過溫度梯度實(shí)驗(yàn)了解到實(shí)驗(yàn)成功的復(fù)性溫度范圍,選擇中間的一個溫度點(diǎn)來保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。朗基T20、T30 PCR儀就屬于這一類。
 
通過理論計(jì)算得到的復(fù)性溫度可以作為溫度梯度實(shí)驗(yàn)的中心點(diǎn)來使用,如果認(rèn)為這一溫度就是好的復(fù)性溫度則是錯誤的。因?yàn)閺?fù)性的溫度與緩沖液中的離子強(qiáng)度、DMSO的含量、Mg2+離子的濃度等都有直接關(guān)系,而研究人員一般并不了解所用的緩沖液中這些因素的含量或是在計(jì)算時(shí)都采用了缺省值。
 
另外,假設(shè)理論計(jì)算是正確的,但PCR儀的溫度還有準(zhǔn)確性和精確性的問題,一般都在±0.3至±0.5,也會影響到實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,通過實(shí)驗(yàn)來確定復(fù)性溫度可以解決儀器準(zhǔn)確性問題。這也是有些實(shí)驗(yàn)在一臺儀器上做得很好,換一臺儀器就不好的一個原因。當(dāng)然溫度梯度功能也可用于變性溫度等的優(yōu)化。
4計(jì)算控溫與模塊控溫
模塊控溫是早期PCR儀所使用的控溫方式,即所設(shè)定的溫度為加熱模塊的溫度,在變溫過程中,快要達(dá)到目標(biāo)溫度時(shí),PCR儀將升降溫速率降低,讓模塊的溫度慢慢接近目的溫度,而不發(fā)生過沖。
 
計(jì)算控溫也稱為管式控溫,即考慮的是PCR反應(yīng)管中的溫度,為了加快使反應(yīng)管中溫度達(dá)到目的溫度,模塊溫度先過沖,然后在反應(yīng)管中溫度接近達(dá)到目的溫度時(shí)調(diào)節(jié)到合適的溫度,調(diào)節(jié)方式是通過理論計(jì)算與實(shí)驗(yàn)相結(jié)合而來的,與反應(yīng)管中的反應(yīng)液的體積有關(guān),因此計(jì)算控溫模式都需要實(shí)驗(yàn)人員輸入反應(yīng)液的體積。計(jì)算控溫模式已經(jīng)是普遍采用的方式了。
5 斷電保護(hù)功能
這也是一個很有用的功能,特別是在中小城市,經(jīng)常會發(fā)生短時(shí)間停電、保險(xiǎn)絲融斷以及空氣開關(guān)跳閘等現(xiàn)象,如果沒有這一功能,開機(jī)后不能自動接下來進(jìn)行實(shí)驗(yàn),往往會影響工作。
6熱蓋功能
熱蓋功能是各個廠家都有的,如果沒有,怕是沒人要了。熱蓋也分為可調(diào)式熱蓋和不可調(diào)式熱蓋??烧{(diào)式熱蓋中又有力矩式可調(diào)熱蓋,主要解決在壓緊熱蓋時(shí)用力過大及過小的問題。
7. 軟件功能
儀器軟件功能方面當(dāng)然都可以設(shè)置PCR程序了,只是方便不方便的問題,用熟了便方便了,差別都不大。只是有的顯示屏大些,可以畫出一個溫度變化曲線來,但大都是模擬的,意義也不大,只是好看些。還有如每個循環(huán)增減溫度以及增減時(shí)間的功能,好像多數(shù)儀器都有,如有這方面的需要則要注意一下。有些軟件有循環(huán)嵌套功能,在一些特殊實(shí)驗(yàn)中也是用得上的。
 
8.使用壽命
儀器的使用壽命,如果不考慮維修的成本,則主要與半導(dǎo)體制冷片的壽命相關(guān)(由于其他變溫技術(shù)如壓縮機(jī)以及空氣加熱在普通PCR儀上已經(jīng)不多見了,因此在此不再多述),因?yàn)槠渌考伎梢跃S修,但半導(dǎo)體制冷片廠家是不維修的,也不允許更換。
 
PCR儀中這一關(guān)鍵部件的性能等廠家一般是不提供的。大家只能通過對半導(dǎo)體制冷片技術(shù)的了解以及對儀器使用時(shí)間及次數(shù)來了解了。變溫對于半導(dǎo)體制冷片是一個考驗(yàn),如果只是保溫,對半導(dǎo)體制冷片的影響是較小的,但對電源部分的影響較大。
9.電源可靠性
這是一個很重要的因素,但也是用戶有所忽視一個因素。因?yàn)榻^大多數(shù)的儀器出現(xiàn)故障都是由于電源問題或是電源問題造成的。由于PCR儀是一個變溫儀器,也是一個使用時(shí)間長并且經(jīng)常連續(xù)使用的儀器,有些用戶一天使用達(dá)20小時(shí)左右。
 
電源出問題的原因是多方面的,一是潮氣和灰塵,在國內(nèi),北方的灰塵很大,南方的潮氣很重。有時(shí)灰塵大到有些PCR儀打開后看不到電子元件了,電路板散熱不好,造成電源部分燒壞。有時(shí)潮氣大到儀器內(nèi)可以流出水來,造成電路板短路,電源部分燒壞。
 
另一個重要原因是電網(wǎng)中有較多的高壓脈沖群或電壓過高,進(jìn)口的設(shè)備較少考慮這些問題,因此這些設(shè)備在國內(nèi)的故障率比在國外高很多。有些美國生產(chǎn)的儀器設(shè)計(jì)時(shí)考慮110V多些,雖然在220V的條件下也能正常運(yùn)行,但長時(shí)間在240V左右運(yùn)行則很容易出問題。
 
現(xiàn)在PCR儀所用的電源大多為開關(guān)電源,但也有用環(huán)形變壓器的,后者重量較大,對電網(wǎng)也有影響。開關(guān)電源最新的技術(shù)是整體開關(guān)電源,即整個電源封在一個筆記本電腦硬盤大小的盒子內(nèi),可以防止潮氣和灰塵,通過一個大的散熱器和散熱風(fēng)扇來散熱,內(nèi)置過溫、過壓等保護(hù)功能,因此故障率很低,比較適合中國的國情。
 
10 維修成本與保修時(shí)間
這是一個很實(shí)際的問題,大多數(shù)PCR儀都只保修一年,有些在用戶的要求下會增加保修時(shí)間。一般儀器的保修費(fèi)用為儀器價(jià)格的8-12%每年,所以保修也就是錢。一般來講進(jìn)口儀器的維修成本會比較高,一是配件成本本身就高,二是運(yùn)輸費(fèi)用及進(jìn)口關(guān)稅等。
 
另外進(jìn)口儀器廠家一般都不允許進(jìn)行原件級的維修,是出于利潤以及質(zhì)量兩方面的考慮,其實(shí)國外元件級維修的成本也許比更換電路板成本還高。因此只有國內(nèi)人員才進(jìn)行元件級的維修,國內(nèi)人力成本低,水平也高些。
 
11 溫度的準(zhǔn)確性與精確性
準(zhǔn)確性與精確性都是有標(biāo)準(zhǔn)定義的,就PCR儀來講,準(zhǔn)確性指的是設(shè)定溫度與實(shí)際溫度差別的大小,而精確性則是指不同孔間溫度的差別。一般來講,加熱模塊的中心溫度的準(zhǔn)確性和精確性都要好些。
 
有些儀器廠家或代理商會將儀器的顯示精度作為儀器精確度指標(biāo),如將顯示精度0.1度說成精確度為0.1度。儀器顯示的溫度一般都是溫度傳感器所采集的數(shù)據(jù)在一小段時(shí)間內(nèi)的平均值,有些也是經(jīng)過處理的,如有些儀器在達(dá)到溫度后就一動不動或達(dá)到溫度前的數(shù)秒到十?dāng)?shù)秒內(nèi)顯示一個固定的溫度,然后突然顯示達(dá)到的溫度等。另外,溫度的準(zhǔn)確性與精確性跟所選的溫度點(diǎn)有很大的關(guān)系,一般儀器都選在60度左右來注明,因?yàn)檫@也是實(shí)驗(yàn)人員都關(guān)心的溫度點(diǎn)。
 
12 升降溫速率
這是很多的購買者很關(guān)心的問題,它可能會影響PCR反應(yīng)時(shí)間。但在這個問題上有些理解上的差別。一般儀器所標(biāo)注都是MAX大升降溫速率,而用戶所理解的是溫度差與升降溫所用時(shí)間比值。這是有些用戶發(fā)現(xiàn)升降溫速率達(dá)不到儀器所標(biāo)注的速率的原因。用戶所關(guān)心的是對用戶來講有意義的。
 
過度的升降溫速率對于用戶來講意義不大,因?yàn)槿菀滓l(fā)溫度過沖,并需要較長時(shí)間來調(diào)整。使用過壓縮機(jī)型PCR儀的人可能會有這方面的經(jīng)驗(yàn)。這也是為什么大家會發(fā)現(xiàn)升降溫速率很高的PCR儀其反應(yīng)時(shí)間與中等速率的PCR儀差別很小的一個原因。
13 其他因素
如噪音大小、外觀等也是需要考慮的。噪音就不必講了,當(dāng)然是越小越好。外觀上各有所好,也不好評說,但在國內(nèi)還需要考慮的有是否顯臟。
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