國(guó)產(chǎn)PCR儀購(gòu)買(mǎi)時(shí)的注意事項(xiàng)
PCR儀作為分子生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的常規(guī)儀器，每年都有數(shù)千臺(tái)的選購(gòu)量，這兩年一批國(guó)產(chǎn)PCR儀正在興起。購(gòu)買(mǎi)國(guó)產(chǎn)PCR儀需要考慮以下因素
1樣本管的種類(lèi)
現(xiàn)在主要有0.2ml和0.5ml兩種，使用0.5ml PCR管的人員已經(jīng)很少了，一是0.5ml PCR專(zhuān)用的薄壁管很少見(jiàn)，二是如果想要較大體積的PCR產(chǎn)物，可以通過(guò)多分幾個(gè)0.2ml PCR管來(lái)實(shí)現(xiàn)。除非經(jīng)常需要較大體積的PCR產(chǎn)物，否則可以不必考慮0.5ml型的PCR儀。
2 樣本容量
種類(lèi)很多，0.2ml的有96孔和48孔，0.5ml的有60孔和30孔，384孔等，當(dāng)然還有一些其他組合：如0.2ml的48孔與0.5ml的30孔組合。購(gòu)買(mǎi)96孔的還是48孔的PCR儀主要從經(jīng)濟(jì)上考慮，當(dāng)然現(xiàn)在很多的廠家都有雙48孔的產(chǎn)品，可以當(dāng)兩臺(tái)48孔的PCR儀使用，也是一個(gè)比較好的選擇，但48孔的PCR儀大都沒(méi)有梯度功能。
一般來(lái)講384孔都是用384孔的，對(duì)封膜的要求比較高，一定要采用專(zhuān)門(mén)用于PCR反應(yīng)的膜，普通封板膜會(huì)影響PCR反應(yīng)，造成實(shí)驗(yàn)失敗。還有一些特別的PCR儀，如用于原位PCR的。
3 溫度梯度功能
即不同列或不同行之間溫度可以為不同的溫度。這一功能對(duì)于固定PCR程序的檢驗(yàn)人員來(lái)講，可能用處不大，但對(duì)于經(jīng)常進(jìn)行不同基因擴(kuò)增的研究人員來(lái)講可以說(shuō)是必須的。因?yàn)榇蠹叶贾繮CR反應(yīng)的復(fù)性溫度是PCR成功的要素，PCR復(fù)性溫度只有通過(guò)溫度梯度實(shí)驗(yàn)來(lái)選擇才是適宜的，你可以通過(guò)溫度梯度實(shí)驗(yàn)了解到實(shí)驗(yàn)成功的復(fù)性溫度范圍，選擇中間的一個(gè)溫度點(diǎn)來(lái)保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。朗基T20、T30 PCR儀就屬于這一類(lèi)。
通過(guò)理論計(jì)算得到的復(fù)性溫度可以作為溫度梯度實(shí)驗(yàn)的中心點(diǎn)來(lái)使用，如果認(rèn)為這一溫度就是好的復(fù)性溫度則是錯(cuò)誤的。因?yàn)閺?fù)性的溫度與緩沖液中的離子強(qiáng)度、DMSO的含量、Mg2+離子的濃度等都有直接關(guān)系，而研究人員一般并不了解所用的緩沖液中這些因素的含量或是在計(jì)算時(shí)都采用了缺省值。
另外，假設(shè)理論計(jì)算是正確的，但PCR儀的溫度還有準(zhǔn)確性和精確性的問(wèn)題，一般都在±0.3至±0.5，也會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定復(fù)性溫度可以解決儀器準(zhǔn)確性問(wèn)題。這也是有些實(shí)驗(yàn)在一臺(tái)儀器上做得很好，換一臺(tái)儀器就不好的一個(gè)原因。當(dāng)然溫度梯度功能也可用于變性溫度等的優(yōu)化。
4計(jì)算控溫與模塊控溫
模塊控溫是早期PCR儀所使用的控溫方式，即所設(shè)定的溫度為加熱模塊的溫度，在變溫過(guò)程中，快要達(dá)到目標(biāo)溫度時(shí)，PCR儀將升降溫速率降低，讓模塊的溫度慢慢接近目的溫度，而不發(fā)生過(guò)沖。
計(jì)算控溫也稱(chēng)為管式控溫，即考慮的是PCR反應(yīng)管中的溫度，為了加快使反應(yīng)管中溫度達(dá)到目的溫度，模塊溫度先過(guò)沖，然后在反應(yīng)管中溫度接近達(dá)到目的溫度時(shí)調(diào)節(jié)到合適的溫度，調(diào)節(jié)方式是通過(guò)理論計(jì)算與實(shí)驗(yàn)相結(jié)合而來(lái)的，與反應(yīng)管中的反應(yīng)液的體積有關(guān)，因此計(jì)算控溫模式都需要實(shí)驗(yàn)人員輸入反應(yīng)液的體積。計(jì)算控溫模式已經(jīng)是普遍采用的方式了。
5 斷電保護(hù)功能
這也是一個(gè)很有用的功能，特別是在中小城市，經(jīng)常會(huì)發(fā)生短時(shí)間停電、保險(xiǎn)絲融斷以及空氣開(kāi)關(guān)跳閘等現(xiàn)象，如果沒(méi)有這一功能，開(kāi)機(jī)后不能自動(dòng)接下來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，往往會(huì)影響工作。
6熱蓋功能
熱蓋功能是各個(gè)廠家都有的，如果沒(méi)有，怕是沒(méi)人要了。熱蓋也分為可調(diào)式熱蓋和不可調(diào)式熱蓋。可調(diào)式熱蓋中又有力矩式可調(diào)熱蓋，主要解決在壓緊熱蓋時(shí)用力過(guò)大及過(guò)小的問(wèn)題。
7. 軟件功能
儀器軟件功能方面當(dāng)然都可以設(shè)置PCR程序了，只是方便不方便的問(wèn)題，用熟了便方便了，差別都不大。只是有的顯示屏大些，可以畫(huà)出一個(gè)溫度變化曲線來(lái)，但大都是模擬的，意義也不大，只是好看些。還有如每個(gè)循環(huán)增減溫度以及增減時(shí)間的功能，好像多數(shù)儀器都有，如有這方面的需要?jiǎng)t要注意一下。有些軟件有循環(huán)嵌套功能，在一些特殊實(shí)驗(yàn)中也是用得上的。
8.使用壽命
儀器的使用壽命，如果不考慮維修的成本，則主要與半導(dǎo)體制冷片的壽命相關(guān)（由于其他變溫技術(shù)如壓縮機(jī)以及空氣加熱在普通PCR儀上已經(jīng)不多見(jiàn)了，因此在此不再多述），因?yàn)槠渌考伎梢跃S修，但半導(dǎo)體制冷片廠家是不維修的，也不允許更換。
PCR儀中這一關(guān)鍵部件的性能等廠家一般是不提供的。大家只能通過(guò)對(duì)半導(dǎo)體制冷片技術(shù)的了解以及對(duì)儀器使用時(shí)間及次數(shù)來(lái)了解了。變溫對(duì)于半導(dǎo)體制冷片是一個(gè)考驗(yàn)，如果只是保溫，對(duì)半導(dǎo)體制冷片的影響是較小的，但對(duì)電源部分的影響較大。
9.電源可靠性
這是一個(gè)很重要的因素，但也是用戶有所忽視一個(gè)因素。因?yàn)榻^大多數(shù)的儀器出現(xiàn)故障都是由于電源問(wèn)題或是電源問(wèn)題造成的。由于PCR儀是一個(gè)變溫儀器，也是一個(gè)使用時(shí)間長(zhǎng)并且經(jīng)常連續(xù)使用的儀器，有些用戶一天使用達(dá)20小時(shí)左右。
電源出問(wèn)題的原因是多方面的，一是潮氣和灰塵，在國(guó)內(nèi)，北方的灰塵很大，南方的潮氣很重。有時(shí)灰塵大到有些PCR儀打開(kāi)后看不到電子元件了，電路板散熱不好，造成電源部分燒壞。有時(shí)潮氣大到儀器內(nèi)可以流出水來(lái)，造成電路板短路，電源部分燒壞。
另一個(gè)重要原因是電網(wǎng)中有較多的高壓脈沖群或電壓過(guò)高，進(jìn)口的設(shè)備較少考慮這些問(wèn)題，因此這些設(shè)備在國(guó)內(nèi)的故障率比在國(guó)外高很多。有些美國(guó)生產(chǎn)的儀器設(shè)計(jì)時(shí)考慮110V多些，雖然在220V的條件下也能正常運(yùn)行，但長(zhǎng)時(shí)間在240V左右運(yùn)行則很容易出問(wèn)題。
現(xiàn)在PCR儀所用的電源大多為開(kāi)關(guān)電源，但也有用環(huán)形變壓器的，后者重量較大，對(duì)電網(wǎng)也有影響。開(kāi)關(guān)電源最新的技術(shù)是整體開(kāi)關(guān)電源，即整個(gè)電源封在一個(gè)筆記本電腦硬盤(pán)大小的盒子內(nèi)，可以防止潮氣和灰塵，通過(guò)一個(gè)大的散熱器和散熱風(fēng)扇來(lái)散熱，內(nèi)置過(guò)溫、過(guò)壓等保護(hù)功能，因此故障率很低，比較適合中國(guó)的國(guó)情。
10 維修成本與保修時(shí)間
這是一個(gè)很實(shí)際的問(wèn)題，大多數(shù)PCR儀都只保修一年，有些在用戶的要求下會(huì)增加保修時(shí)間。一般儀器的保修費(fèi)用為儀器價(jià)格的8-12%每年，所以保修也就是錢(qián)。一般來(lái)講進(jìn)口儀器的維修成本會(huì)比較高，一是配件成本本身就高，二是運(yùn)輸費(fèi)用及進(jìn)口關(guān)稅等。
另外進(jìn)口儀器廠家一般都不允許進(jìn)行原件級(jí)的維修，是出于利潤(rùn)以及質(zhì)量?jī)煞矫娴目紤]，其實(shí)國(guó)外元件級(jí)維修的成本也許比更換電路板成本還高。因此只有國(guó)內(nèi)人員才進(jìn)行元件級(jí)的維修，國(guó)內(nèi)人力成本低，水平也高些。
11 溫度的準(zhǔn)確性與精確性
準(zhǔn)確性與精確性都是有標(biāo)準(zhǔn)定義的，就PCR儀來(lái)講，準(zhǔn)確性指的是設(shè)定溫度與實(shí)際溫度差別的大小，而精確性則是指不同孔間溫度的差別。一般來(lái)講，加熱模塊的中心溫度的準(zhǔn)確性和精確性都要好些。
有些儀器廠家或代理商會(huì)將儀器的顯示精度作為儀器精確度指標(biāo)，如將顯示精度0.1度說(shuō)成精確度為0.1度。儀器顯示的溫度一般都是溫度傳感器所采集的數(shù)據(jù)在一小段時(shí)間內(nèi)的平均值，有些也是經(jīng)過(guò)處理的，如有些儀器在達(dá)到溫度后就一動(dòng)不動(dòng)或達(dá)到溫度前的數(shù)秒到十?dāng)?shù)秒內(nèi)顯示一個(gè)固定的溫度，然后突然顯示達(dá)到的溫度等。另外，溫度的準(zhǔn)確性與精確性跟所選的溫度點(diǎn)有很大的關(guān)系，一般儀器都選在60度左右來(lái)注明，因?yàn)檫@也是實(shí)驗(yàn)人員都關(guān)心的溫度點(diǎn)。
12 升降溫速率
這是很多的購(gòu)買(mǎi)者很關(guān)心的問(wèn)題，它可能會(huì)影響PCR反應(yīng)時(shí)間。但在這個(gè)問(wèn)題上有些理解上的差別。一般儀器所標(biāo)注都是MAX大升降溫速率，而用戶所理解的是溫度差與升降溫所用時(shí)間比值。這是有些用戶發(fā)現(xiàn)升降溫速率達(dá)不到儀器所標(biāo)注的速率的原因。用戶所關(guān)心的是對(duì)用戶來(lái)講有意義的。
過(guò)度的升降溫速率對(duì)于用戶來(lái)講意義不大，因?yàn)槿菀滓l(fā)溫度過(guò)沖，并需要較長(zhǎng)時(shí)間來(lái)調(diào)整。使用過(guò)壓縮機(jī)型PCR儀的人可能會(huì)有這方面的經(jīng)驗(yàn)。這也是為什么大家會(huì)發(fā)現(xiàn)升降溫速率很高的PCR儀其反應(yīng)時(shí)間與中等速率的PCR儀差別很小的一個(gè)原因。
13 其他因素
如噪音大小、外觀等也是需要考慮的。噪音就不必講了，當(dāng)然是越小越好。外觀上各有所好，也不好評(píng)說(shuō)，但在國(guó)內(nèi)還需要考慮的有是否顯臟。
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