細(xì)胞調(diào)亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過(guò)程，并出現(xiàn)一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達(dá)和特定的生物大分子合成等。
流式細(xì)胞儀可以對(duì)不同細(xì)胞凋亡的過(guò)程進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞膜完整性來(lái)反應(yīng)細(xì)胞凋亡是常用的流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡常用方法之一。
其原理是：①用Annexin V檢測(cè)早期凋亡細(xì)胞：Annexin V可以結(jié)合細(xì)胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，不會(huì)被檢測(cè)到，凋亡時(shí)外翻到細(xì)胞膜外表面，可以被檢測(cè)到。
②用PI或者7AAD檢測(cè)晚期凋亡細(xì)胞：早期凋亡的細(xì)胞，未喪失細(xì)胞膜選擇通透性，PI/7AAD無(wú)法進(jìn)入，晚期凋亡的細(xì)胞，失去細(xì)胞膜選擇通透性，PI/7AAD可以對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。但由于Annexin V本身沒(méi)有熒光，因此需要偶聯(lián)熒光基團(tuán)，以便被流式細(xì)胞儀檢測(cè)，通常會(huì)偶聯(lián)FITC、eGFP、AF488、APC等基團(tuán)。
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒一般會(huì)將偶聯(lián)不同熒光基團(tuán)的Annexin V與PI和7AAD任意組合。細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的選擇應(yīng)該遵循以下原則：
如果細(xì)胞沒(méi)有自發(fā)熒光，可以選擇常用的紅綠組合的試劑盒，比如Annexin V-FITC/PI或者Annexin V-eGFP/PI。這類(lèi)試劑盒由于只需要488 nm激光器，并且熒光光譜重疊較小，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求相對(duì)較低，所以應(yīng)用非常廣泛。
如果細(xì)胞本身需要檢測(cè)綠色熒光，則應(yīng)該避開(kāi)FITC、eGFP等綠色熒光，可以選擇Annexin V-APC/PI或者Annexin V-APC/7AAD組合的試劑盒。由于APC和PI的熒光光譜有較大重疊，因此對(duì)檢測(cè)儀器和技術(shù)人員有較高要求，初學(xué)者通常需要仔細(xì)詢問(wèn)相關(guān)技術(shù)人員方可開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。
如果細(xì)胞本身需要檢測(cè)紅色熒光，則應(yīng)確認(rèn)紅色熒光的激發(fā)光和發(fā)射光波長(zhǎng)，如果與PI和7AAD的激發(fā)光和發(fā)射光均相似，則不能用這類(lèi)試劑盒檢測(cè)該細(xì)胞的凋亡。如果激發(fā)光或者發(fā)射光與PI或者7AAD有較大差異，則要具體情況具體分析，以熒光光譜重疊小為原則進(jìn)行試劑盒的選擇。
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