線性放大原則
線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時間、層析中溶液用到的CV數(shù)和洗脫樣品CV數(shù)，較大程度保證相同的純化效果。
線性放大原則的具體操作方法可參見下表：
在實際的應(yīng)用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設(shè)備供應(yīng)商提供的層析柱都是幾個固定規(guī)格，可能無法適配具體某項的工藝需求；二是當層析柱直徑超過30cm時，由于柱壁支撐效應(yīng)的降低，通常會造成層析填料的過度壓縮，從而導(dǎo)致反壓增大，小試規(guī)模優(yōu)化設(shè)計的線性流速則有可能無法實現(xiàn)。此時，可以考慮固定保留時間原則。
固定保留時間原則
固定保留時間原則只要求保持層析工藝的保留時間不變，層析柱柱高和線性流速則可以同時改變。這樣層析柱的選擇就會更加靈活。一般的蛋白純化，如親和層析、疏水層析和離子交換層析的結(jié)合/洗脫模式，都有成功應(yīng)用固定保留時間原則進行放大工藝的開發(fā)的案例，這樣可以避免珍貴樣品、層析填料的浪費，有效降低生產(chǎn)成本。
當然，固定保留時間原則也具有一定的局限性，對于一些對流擴散主導(dǎo)的層析，也就是層析純化依賴于理論塔板數(shù)的層析方法，如凝膠過濾層析，層析線性流速對于分離效果具有顯著影響，則不適用于固定保留時間原則。多模式的層析通常也不適用固定保留時間原則。
層析工藝需要確認的因素
層析系統(tǒng)
與小試所用的層析系統(tǒng)相比，商業(yè)化生產(chǎn)用層析系統(tǒng)需要考慮：
1.系統(tǒng)管路的死體積。大規(guī)模生產(chǎn)用層析系統(tǒng)往往具有較大的死體積，層析過程會造成樣品的擴散，從而影響洗脫收集體積和分離分辨率。
2.紫外流通池長度。紫外流通池的長度變化會造成蛋白吸收峰高的變化，從而影響洗脫峰的起收點和停收點。
3.泵的設(shè)計。泵的設(shè)計會帶來不同的剪切力，對產(chǎn)品的穩(wěn)定性帶來影響。同時，泵的精度還會影響緩沖液及樣品體積的控制。
4.混合效果。如果使用雙泵進行線性洗脫，雙泵緩沖液的混合則會影響最終的洗脫效果。
層析柱
層析柱的選擇需要考慮的因素有：
1.層析柱的尺寸和材質(zhì)。層析柱的尺寸可以根據(jù)上文規(guī)模放大的幾項原則來確定。層析柱常用的材質(zhì)有玻璃、丙烯酸和不銹鋼，使用不同材質(zhì)的層析柱需要考慮其溶出物/浸出物，以及對層析填料清潔試劑的耐受性。
2.層析柱與層析系統(tǒng)和層析填料的匹配性
3.層析柱操作的難易程度。 隨著層析柱直徑的增加，層析柱的裝填也變困難。通常的解釋是隨著柱直徑的增加，填料的柱壁支撐效應(yīng)減少，造成反壓升高，柱床不穩(wěn)定性增加，從而影響分離效果。此外，采用可自動化裝柱的層析柱，可有效增加層析柱放大的成功率。
層析填料
在小試規(guī)模的工藝開發(fā)階段，通常會對層析填料的結(jié)合載量、配基脫落量等基礎(chǔ)性能進行嚴格篩選，但是中試及生產(chǎn)規(guī)模的工藝往往會暴露層析填料一些容易被忽視的問題。例如上文提及的柱壁支撐效應(yīng)減少，造成反壓升高的問題，在小試階段就極難被發(fā)現(xiàn)。
非層析因素
在層析工藝的放大過程中，還需要考慮和確認一些非層析因素：
上游培養(yǎng)來料
緩沖液的配制方法及儲存
中間品的處理及保存時間
操作溫度
蘇州阿爾法生物提供層析系統(tǒng)填料包括 瓊脂糖凝膠過濾基質(zhì)填料、組氨酸標簽蛋白分離層析親和蛋白純化介質(zhì)等用于蛋白純化、蛋白質(zhì)分離等。
