RNA 代表核糖核酸和 siRNA——小干擾 RNA（也稱為沉默 RNA）。siRNA 是分子中的一種短 (21-23 bp) 雙鏈 RNA 核苷酸，在細胞中發(fā)揮各種生物系統(tǒng)的功能。siRNA轉染是“轉移"，將siRNA細胞內轉移到細胞中，這是一個涉及基因沉默的過程。為了成功優(yōu)化 siRNA 轉染，需要合適的轉染試劑和轉染方法來進行體外和體內RNAi 實驗。這些過程因細胞類型和轉染方法而異。對于siRNA轉染有許多針對特定細胞類型優(yōu)化的體外siRNA 轉染試劑。
siRNA轉染技術
體內siRNA于siRNA轉染技術 應用是基于納米顆粒、聚合物或 脂質體的一種技術。
科學家們發(fā)現(xiàn) siRNA 在大規(guī)模沉默基因表達和研究基因功能方面比較有價值。此類實驗的成功通常取決于 siRNA的轉染方法?？梢允褂脙?yōu)化的 轉染試劑 和試劑盒在體外和體內轉染 siRNA。
影響siRNA 轉染效率的因素主要包括培養(yǎng)細胞的生長狀況、轉染發(fā)生的條件、引入的轉染方法、以及實驗中使用的 siRNA 的質量和數(shù)量。
同時，細胞密度、體積、暴露時間和 siRNA 細胞的數(shù)量對 siRNA 轉染的成功率以及在 穩(wěn)定轉染實驗中建立穩(wěn)定的 RNAi 敲低細胞系也起著重要作用。
RNAi 誘導的基因沉默通常用于研究培養(yǎng)細胞中的基因功能。大多數(shù)情況下，這些基因功能是由引入小干擾 RNA (siRNA) 或 microRNA (miRNA) 的介入所引起的。siRNA 分子屬于雙鏈，長度為 20-24 個堿基對，終止于具有磷酸化 5' 和羥基化 3' 末端的兩個突出核苷酸。一個 miRNA 分子是單鏈的，有 22 個核苷酸長；它與 RNA 的互補片段結合形成雙鏈分子。這兩種分子都可能在細胞中自然產生，也可能是人工引入的，它們的作用可能會持續(xù)三到七天。
siRNA體內轉染現(xiàn)狀
由于 siRNA 具有穩(wěn)定性差、遞送效率低、生物分布不正確以及靶向特定組織等缺點，因此體內 RNAi 研究面臨了許多技術挑戰(zhàn)。這些技術挑戰(zhàn)意味著不適宜在動物身上進行 大量的RNAi 實驗。
siRNA體內轉染主要方法：是通過 RNAi技術：即：使用 siRNA 或 miRNA 、質粒 DNA 、病毒載體等，在體內表達生成短鏈 RNA (shRNA)，隨后加工成活性 siRNA。一般來說，基于病毒的 shRNA 載體在體內提供較高的遞送效率，但構建起來比較耗費時間，并且存在免疫原性等問題。
使用 RNAi 技術面臨的主要挑戰(zhàn)之一是成功地將穩(wěn)定的功能性 siRNA 或 microRNA 分子傳遞到目標組織。siRNA 或 miRNA 必須克服核酸酶的降解，逃避先天免疫系統(tǒng)的檢測，從而減少脫靶效應并被靶組織所吸收。近來研究發(fā)現(xiàn)對 siRNA 或 miRNA 進行化學修飾可以增加它們在體內的穩(wěn)定性。這些化學修飾維持了 siRNA 分子的效力、功效和特異性，并增加了它們在生物體動態(tài)環(huán)境中的整體穩(wěn)定性。
目前市場上常用的siRNA轉染試劑主要有RFect 系列轉染試劑盒、Lipo2000、Lipo3000，RNAiMAX等都可以用于siRNA的體外化學轉染法。
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