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怎樣正確選擇細(xì)胞培養(yǎng)試劑?

 更新時(shí)間:2022-05-05 點(diǎn)擊量:1182

細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn),做過細(xì)胞培養(yǎng)的小伙伴都知道培養(yǎng)過程中的常用到的生物試劑的作用嗎?小編大概歸納了一下在細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見試劑的作用,以便更好地了解細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

一、了解培養(yǎng)基

雖然細(xì)胞系培養(yǎng)沒有固定的培養(yǎng)基,但針對(duì)不同特性的細(xì)胞所選擇的培養(yǎng)基也會(huì)有所不相同,比如貼壁培養(yǎng)選擇MEM培養(yǎng)基會(huì)具有較好的貼壁效果;懸浮細(xì)胞一般采用RPMI-1640培養(yǎng)基生長(zhǎng)狀態(tài)旺盛;無血清培養(yǎng)的細(xì)胞一般會(huì)選擇AIM V (12005)或SFM培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基

根據(jù)細(xì)胞特性在培養(yǎng)基生產(chǎn)過程中常會(huì)添加一些特殊成分: 

1.  L-谷氨酰胺

 L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)過程中主要為細(xì)胞提供能量來源,并且會(huì)參與到細(xì)胞的核酸代謝及蛋白質(zhì)合成,它的缺陷在于降解時(shí)會(huì)釋放氨基,對(duì)細(xì)胞會(huì)造成一定的毒性傷害。所以一些致敏細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要注意谷氨酸鈉及氨成分的含量。

2. GlutaMAX-Ⅰ

GlutaMAX-I 二肽屬于谷氨酰胺的衍生品,其作用機(jī)理基本上與L-谷氨酰胺相一致,不同的是GlutaMAX-I 的結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定,降解度低,所以釋放的氨基毒性物質(zhì)也較少,適用于無毒性的供應(yīng)能量需求。

 3.酚紅指示劑

酚紅作為一種化學(xué)指示劑,常用被于酸堿度PH 值的辨識(shí)。它在酸性環(huán)境下呈現(xiàn)顯色為黃色,中型溶液時(shí)呈現(xiàn)紅色,偏堿性環(huán)境時(shí)顯示顏色為紫色。正常情況下,酚紅作為指示劑,在細(xì)胞培養(yǎng)過程中一般不與培養(yǎng)物發(fā)生反應(yīng),但是對(duì)于哺乳動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),會(huì)起到類固醇激素的細(xì)胞反應(yīng),并且在細(xì)胞檢測(cè)時(shí)也會(huì)對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)起到干擾作用。因此,一般在培養(yǎng)哺乳動(dòng)物和打算做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)一般不用含酚紅的培養(yǎng)基。

二.細(xì)胞培養(yǎng)、檢測(cè)過程中的試劑

1.臺(tái)盼藍(lán)染色與活細(xì)胞計(jì)數(shù)

普通細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法將細(xì)胞懸浮液用無血清培養(yǎng)基稀釋后,加入一定比例的臺(tái)盼蘭染色液,輕搖混勻后,用血球計(jì)數(shù)板/細(xì)胞計(jì)數(shù)板中進(jìn)行人工或機(jī)器計(jì)數(shù)操作。其中未染色的細(xì)胞為活細(xì)胞,染為藍(lán)色的細(xì)胞為死細(xì)胞。

2.抗生素的使用

為防止下的培養(yǎng)污染在有些細(xì)胞培養(yǎng)過程中也會(huì)適量添加抗生素或康霉菌素,由于這些添加劑雖能起到抑菌作用但會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和傳代,甚至出現(xiàn)毒殺細(xì)胞的作用。所以,添加時(shí)一定要進(jìn)行細(xì)胞毒性測(cè)試并注意使用濃度。

3.丙酮酸鈉的添加

丙酮酸鈉在細(xì)胞培養(yǎng)過程中一般會(huì)作為葡萄糖的替代品為細(xì)胞生長(zhǎng)提供充足的碳源,可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況添加,有的也會(huì)配備好添加在培養(yǎng)基中。

4.平衡鹽溶液、緩沖液的使用

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的平衡鹽主要有HBS、EBS和Eagles液。

不同緩沖液的碳酸氫鈉的水平也不一致,并且緩沖液的PH也會(huì)根據(jù)培養(yǎng)產(chǎn)物及培養(yǎng)溫度的不同而產(chǎn)生相應(yīng)的變化,可根據(jù)實(shí)際情況選擇使用。

5.培養(yǎng)血清的選擇

細(xì)胞的培養(yǎng)與血清的選擇也具有較大關(guān)系。一般胎牛血清由于成本昂貴一般被用于對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境挑剔的難以生長(zhǎng)的細(xì)胞,比如干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等。普通的肌細(xì)胞、白細(xì)胞等選擇普通的新生牛血清即可。

胎牛血清




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